杨睿博,刘俊秀,朱克然　　作者单位：天津医科大学基础医学院药理教研室

　　【摘要】 目的 观察和分析大溪地诺丽果汁(TAHITIAN　NONI　Juice，TNJ)对正常小鼠免疫功能的影响。方法 选用正常昆明种小鼠40只，随机分成4组。使用不同剂量的TNJ经灌胃给药，每天上午和下午2次给药，用药21d后，摘眼球取血，采用流式细胞仪分析方法检测4组小鼠外周血T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+百分数，并计算CD4+/ CD8+的比值，采用ELISA测定法检测4组小鼠血清中IL-2和IL-4的水平。结果 高中低剂量TNJ组能明显提高正常小鼠外周血中的CD3+和CD4+TC百分数，亦可提高小鼠血清中IL-2的含量(P<0.05和P<0.01);中高剂量TNJ组能提高正常小鼠外周血中的CD4+/CD8+的数值(P<0.01)。结论 TNJ是通过对T淋巴细胞亚群的作用，促进机体细胞免疫功能的提高;通过对IL-2的作用，促进和增强TC的活性和杀伤性，从而对正常小鼠具有很好的免疫调节和促进免疫应答的功效。

　　【关键词】 大溪地诺丽果汁;T淋巴细胞亚群;白介素-2;免疫功能

　　【Abstract】 Objective To observe and analyze the effect of TAHITIAN　NONI　Juice(TNJ) on immune function in mice.Methods 40 mice were subjected to 4 groups randomly，which were treated with different concentrations of TNJ twice a day in the morning and in the afternoon orally.21 days after treatment,blood was collected and flow cytometry was used to get the percentage of CD3+ CD4+ CD8+,subpopulation of T lymphocytes in peripheral blood and to get the ratio of CD4+/ CD8+.IL-2 and IL-4 in serum was detected with ELISA.Results Different concentration of TNJ can increase the percentage of CD3+and CD4+ in peripheral blood and elevate the level of IL-2 in serum(P<0.05 and P<0.01); Middle and high concentration of TNJ also elevate the ratio of CD4+/CD8+in blood.Conclusion TNJ can inhance cellular immune function by the effect on subpopulation of T lymphocytes.TNJ can promote and strengthen the activity of T lymphocytes by elevating IL-2 level.

　　【Key words】 TAHITIAN　NONI　Juice，subpopulation of T lymphocytes，interleukin-2， immune function

　　Noni(Morinda citrifolia)是一种茜草科草本植物，为玻利尼西亚人作为民间药物已经有超过两千多年的历史了[1]。据报道，它有很广泛的医疗作用，其中包括在人体和动物身上的抗癌作用[2，3]，本研究观察TNJ对正常小鼠静脉血中， T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+百分数和小鼠血清中IL-2、IL-4含量指标的变化，从而揭示TNJ的增强机体免疫力和抗肿瘤及预防或减轻动脉粥样硬化性疾病[4]的机制。

　　1 材料与方法

　　1.1 主要试剂及仪器

　　大溪地诺丽果汁(TNJ)由大溪地诺丽国际公司提供;白细胞介素-2(IL-2)及白细胞介素-4(IL-4)的ELISA试剂盒：R&D Systems,Inc.USA;T细胞亚群检测试剂采用CD3、CD4及CD8的ELISA试剂盒：上海研辉生物科技有限公司;全自动酶联免疫检测仪：Elx800,Bio-TEK,USA;流式细胞仪：BECKMAN COULTER,USA;YJ-875A型医用净化工作台：吴江市净化设备总厂;GNP-9160型个水式恒温培养箱：上海精宏实验设备有限公司;CO2孵箱：SHELLAB,USA;离心机：上海安亭科学仪器厂生产。

　　1.2 实验动物及分组

　　选用正常昆明种小白鼠40只，雌雄各半，体重(21±2.5)g由天津市药物研究院动物中心提供，随机分成4组，每组10只，分笼饲养。对照组每只以0.4ml生理盐水灌胃;低剂量组以0.1ml大溪地诺丽果汁加上0.3ml生理盐水灌胃;中剂量组以0.2ml大溪地诺丽果汁加上0.2ml生理盐水灌胃;高剂量组以0.4ml大溪地诺丽果汁灌胃。每天上午8点和下午5点给药2次。用药21天后，进行相关分析。

　　1.3 小鼠T淋巴细胞亚群的测定

　　在给药至21天后，取上述实验组小鼠，摘眼球取血0.5ml肝素抗凝混匀。按照试剂盒说明操作，最终上流式细胞仪检测，测定小鼠T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+的百分数。

　　1.4 血清中细胞因子IL-2及IL-4含量的测定

　　在给药至21天后，取上述实验组小鼠，摘眼球取血1ml，置于1.5ml EP管中，在室温下静置3h，红细胞充分沉淀，血液凝固，血清析出，以3000r/min离心15min，吸上清液，按照试剂盒说明操作，最终上全自动酶联免疫检测仪检测，测定血清中细胞因子IL-2及IL-4的含量。

　　1.5 实验数据统计学处理

　　实验数据采用SPSS13.0统计学软件，进行t检验，P<0.05为差异有显著性。

　　2 结果

　　2.1 口服TNJ 21天小鼠外周血T淋巴细胞亚群百分数的影响

　　从表1中看到TNJ低、中、高剂量组可以引起小鼠外周血中T淋巴细胞亚群的CD3+(%)、CD4+(%)提高，与对照组比较均有显著提高P<0.05和0.01;而TNJ中高剂量组亦能引起小鼠外周血中T淋巴细胞亚群的CD4+/CD8+的提高，与对照组比较，P<0.01。表1 口服TNJ 21天小鼠外周血T淋巴细胞亚群百分数的影响

　　2.2 口服TNJ 21天小鼠血清中细胞因子IL-2及IL-4的含量的变化

　　从表2中可以看出，TNJ低、中、高剂量组可以引起小鼠血清中的细胞因子IL-2浓度显著提高，与对照组比较P<0.01。表2 口服TNJ 21天小鼠血清中细胞因子IL-2及IL-4的含量的变化

　　3 讨论

　　T细胞(TC)是人体中最重要的免疫细胞，TC参与细胞免疫，B细胞参与体液免疫。TC中主要由CD4+、CD8+细胞调节细胞免疫，CD4+ T淋巴细胞为辅助性TC，介导细胞免疫，CD4+T淋巴细胞的比率上升，促进机体免疫力提高。CD8+T淋巴细胞在机体免疫应答过程中起免疫负调节作用，被认为是抑制性TC，既可抑制B细胞介导体液免疫。CD4+T淋巴细胞的百分比的提高和CD4/CD8比值的提高，标志着机体免疫力整体的提高[5]。T淋巴细胞亚群对在不同状态下对机体的细胞免疫功能有着重要的意义，已经广泛应用在肿瘤、自体免疫、感染性疾病中，在辅助临床诊断，帮助了解发病机理，判断预后和指导临床治疗上，T淋巴细胞亚群百分数的提升，可说明机体细胞免疫功能的提升[6]。所以现代医学研究中T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+的检测，尤其是CD4+和CD4+/CD8+的提高，已确定是测定机体免疫力提高的金指标。本研究表明TNJ具有提高正常小鼠外周血中的T淋巴细胞亚群中的CD3+、CD4+的百分数和CD4+/CD8+的比值的数值，升高幅度与剂量相关。白介素是指在白细胞或免疫细胞间相互作用的细胞因子，它和血细胞生长因子同属细胞因子。两者相互协调，相互作用，共同完成造血和免疫调节功能。白介素在传递信息，激活与调节免疫细胞，介导T、B细胞活化、增殖与分化及在炎症反应中起重要作用[7]。白介素2(IL-2)是TC生长因子，能使TC在试管内长期存活，刺激TC进入细胞分裂周期。IL-2能增强TC的杀伤活性，在体外它与IL-4、IL-5和IL-6一起共同诱导细胞毒性TC的产生，并使其活性大大增强，延长其生长期;在体内IL-2也能增强抗原诱导的TC活性。本实验结果表明：应用TNJ后实验小鼠血清IL-2的浓度显著升高，升高幅度与剂量相关。但IL-4变化不明显。本研究揭示TNJ是通过对T淋巴细胞亚群的作用，促进机体细胞免疫功能提高的作用;通过对IL-2的作用，促进和增强TC的活性和杀伤性。可见，TNJ对T淋巴细胞亚群百分率和IL-2含量都有一定的作用，所以TNJ对正常小鼠有良好的免疫调节和促进免疫应答的功效。

　　【参考文献】

　　1 Wang MianYing，Brett J West，C Jarakae Jensen，et al.Morinda citrifolia(Noni)：A literature review and recent advance in Noni redearch.Acta Pharmacol Sin，2002，23(12):1127-1141.

　　2 Wang MY，Anderson G，Nowicki D.Preventive effect of Morinda citrifolia (Noni) at the initiation stage of mammary breast cancer induced bv 7.1 2- dimethylbenz (a)-anthracen (DMBA)in female Sprague-Dawley rats.The Proceedings of the Frontie in cancer prevention research，AACR，Boston,2002:17.

　　3 Pryor WA.Cigarette smoke radicals and the role of free radicals in chemical carcinogenicity.Environ Health Perspect ,1997,105(4)：875-882.

　　4 梁光裕. 应用量子共振测试大溪地诺丽果汁的保健效能.中国医学研究与临床,2005,3(11):1-4.

　　5 董爱玲，张玲，王晓雯. 探讨糖尿病患者血糖与甲状腺激素及T细胞亚群的相关性.中国实用医学,2011,6(9):120-121.

　　6 萧雯，杨阳，刘洋洋. 番茄红素与枸杞协同增强小鼠免疫力的实验研究.湖北中医杂志,2010,32(7):8-9.

　　7 马德禄，张俊，高建华，等.诺丽果汁的抗氧化作用及对免疫功能的影响.中国医学研究与临床,2008,6(6):8-10