王宇阳,邵珠民,吕冬梅　　作者单位：徐州医学院附属医院药剂科，江苏徐州221002

　　【摘要】目的 建立高效液相色谱法(HPLC法)测定甲硝唑滴眼液含量的方法。方法 采用Waters XTerra RP18色谱柱，流动相为甲醇-水-三乙胺(50∶50∶0.5)，流速为1.0 ml/min，检测波长为280 nm。绘制标准曲线，进行精密度、回收率、样品含量测定等试验。结果 甲硝唑浓度在44.08～220.4 mg/L范围内线性关系良好(r=0.9999)，平均回收率102.56%，RSD为0.68%。结论 高效液相色谱法测定甲硝唑滴眼液含量方法简便、准确、专属性强。

　　【关键词】 甲硝唑滴眼液;高效液相色谱法;含量测定

　　甲硝唑是硝咪唑类药物，有强大的杀灭滴虫作用，为治疗阴道滴虫病的首选药物。此外，其对肠道及组织阿米巴原虫也有杀灭作用[1]。甲硝唑制成滴眼液可用于厌氧菌所致的外眼感染，在治疗阿米巴角膜炎方面有良好的疗效[2-3]。我院甲硝唑滴眼液由制剂室配制，为确保甲硝唑滴眼液的临床疗效，其质量控制非常重要。目前，我院制剂室甲硝唑滴眼液含量测定应用紫外分光光度法[4]。本实验建立高效液相色谱法(HPLC法)测定甲硝唑滴眼液含量，具有分离好，无干扰，方法快速、简单、准确等优点，可用于甲硝唑滴眼液的质量控制。

　　1 仪器与试药

　　1.1 仪器 美国Waters高效液相色谱仪(包括1525二元高压梯度泵、717自动进样器、2487双波长检测器)，KS-80D型超声清洗机(宁波海曙科技超声设备有限公司)，TG328A型全机械加码分析天平(上海长江科学仪器厂)，UV-2401PC(日本岛津公司)。

　　1.2 试剂及药品 甲硝唑对照品(中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号：0191-9804)，羟苯乙酯对照品(中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号：100847-200501)，氯化钠为药用，甲醇为色谱纯，甲硝唑滴眼液(徐州医学院附属医院制剂室配制)，三乙胺为分析纯，纯化水。

　　2 方法与结果

　　2.1 色谱条件 Waters XTerra RP18色谱柱(4.6 nm×250 nm，5 μm)，流动相为甲醇-水-三乙胺(50∶50∶0.5)，流速1.0 ml/min，检测波长280 nm，灵敏度2.000 AUFS，柱温30℃，进样量20 μl。

　　2.2 对照品溶液的制备 精密称取甲硝唑对照品约100 mg，置50 ml容量瓶中，用甲醇定容到50 ml，摇匀备用，得含甲硝唑2.204 g/L的储备液。精密称取羟苯乙酯对照品适量，用甲醇溶解并定容，得含羟苯乙酯1.342 g/L的储备液。

　　2.3 供试品溶液的制备 精密吸取甲硝唑滴眼液1 ml，置于100 ml容量瓶中，用50%甲醇定容，得供试品溶液。

　　2.4 专属性试验 分别精密吸取对照品和供试品溶液适量，置10 ml的容量瓶中，用50%甲醇定容。在上述色谱条件下，羟苯乙酯的保留时间约为2.6 min，甲硝唑的保留时间约为3.7 min，两者的分离度>1.5，羟苯乙酯对测定甲硝唑无干扰。见图1。

　　2.5 标准曲线的绘制 分别精密吸取甲硝唑对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 ml，分别置10 ml容量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，各进样20 μl。以甲硝唑峰面积(A)为纵坐标，浓度(c)为横坐标，进行线性回归，得回归方程：A=13274.3+21290.2c (r=0.9999,n=5)。甲硝唑在44.08～220.4 mg/L范围内线性关系良好。

　　2.6 精密度试验 取“2.5”项下制备的浓度为132.24 mg/L的甲硝唑对照品溶液，放置0、2、4、6、8 h后，按上述色谱条件进样20 μl，连续进样5次，测定甲硝唑的RSD为0.49%。

　　2.7 回收率试验 精密量取甲硝唑对照品储备液适量共9份，按处方比例加入辅料，用50%甲醇稀释成适当浓度，在上述色谱条件下操作，分别进样，将峰面积带入回归方程计算回收率。结果见表1。

　　2.8 样品含量测定 取甲硝唑滴眼液3批样品，按“2.3”项方法制备样品溶液，以上述色谱条件进样20 μl，各测3份，测定色谱峰面积，以回归方程求算其中含量。结果见表2。图1 高效液相色谱图

　　A.羟苯乙酯; B.甲硝唑对照品; C.甲硝唑滴眼液; 1.羟苯乙酯; 2.甲硝唑　表1 回收率试验结果表2 样品含量测定结果

　　3 讨 论

　　从羟苯乙酯和甲硝唑的紫外吸收图谱来看，随溶剂的改变而其最大吸收波长位移较大[5]。我们选择50%甲醇为溶剂，选择测定波长为280 nm，峰型和分离较满意。

　　关于流动相的选择，有甲醇-水-乙腈-三乙胺、乙腈-水和磷酸缓冲液-甲醇-乙腈等，我们经过试验，选择甲醇-水-三乙胺(50∶50∶0.5)效果较理想，具有操作简单、专属性强等优点。

　　本实验采用高效液相色谱法测定甲硝唑滴眼液中甲硝唑的含量，稳定性好，准确性高，可作为制剂的质量控制措施。

　　【参考文献】

　　[1] 陈新谦，金有预，汤光.新编药物学[M].16版.北京：人民卫生出版社，2007：152.

　　[2] 庄越.实用药物制剂技术[M]. 北京：人民卫生出版社，1999：357.

　　[3] 金秀英，罗时运，杨宝铃，等.棘阿米巴角膜炎的诊断和治疗探讨[J].眼科研究，2000，18(2)：143-145.

　　[4] 惠慧，邵珠民, 刘腾. 紫外分光光度法测定甲硝唑滴眼液的含量[J]. 齐齐哈尔医学院学报，2006，27(16)：1980.

　　[5] 钱亚萍，缪华蓉，方兴华.紫外分光光度法测定甲硝唑漱口液含量[J]. 中国药事，2001，15(4)：251-252.